李勇慧 化文平 王喆之

山麦冬为百合科Liliaceae山麦冬属Liriope多年生草本植物，花淡紫色或淡蓝色，花期5~8月，果期8~10月。民间以其块根入药，性甘微苦、寒，具有养阴润肺、清心除烦、益胃生津的功能，主要用于治疗肺燥干咳、吐血、咯血、肺痿、肺痈、虚劳烦热、消渴、热病津伤、咽干口燥、便秘等症^{[1, 2, 3, 4]}。山麦冬Liriope spicata在性味、功能、主治等方面与麦冬Ophiopogon japonicus极为相似，《中国药典》对其二者均有收载 ^{[5, 6]}，近年来，山麦冬已逐渐替代中药麦冬成为药材市场的主流品种。此外，山麦冬也常用作园林绿化草种，在城市道路两旁、公园、校园等场所多见栽培观赏。但是，由于其用药部位以块根为主，自然资源破坏严重，加之种子繁殖受季节的限制，自然资源破坏严重。因此，采用组织培养的方法可以获得大量获得大量种苗，以供快速繁育栽培。本文以叶片为材料，成功建立了器官发生和植株再生体系，对其规模化和商品化生产开发，并为利用生物技术改良其品质，建立无病毒株系等均有一定的参考价值。百合科的一些种属的组织培养已有报道^{[7, 8]}，但山麦冬未见报道，尤其本文以叶片为外植体进行离体培养实属此种首例。

1 材料与方法

1 .1 材料：山麦冬（Liriope spicata (Thunb.) Lour.），又名大叶麦冬、土麦冬，采于陕西西安，经陕西师范大学生命科学学院植物分类教研室鉴定。

1.2 培养基： 以MS为基本培养基， 蔗糖浓度为3%、pH 5.8 ~ 6.0，用约0.7%琼脂固化，分装后115℃条件下灭菌25分钟。

1.3 外植体的消毒：取生长旺盛的山麦冬植株，自其叶基部剪取新生的幼嫩叶片，用毛刷刷洗叶片，并用0.1%的洗衣粉溶液浸泡20 min，之后用自来水冲洗约2 h，在超净工作台上先用75%的酒精处理约30 ~ 40 s，再转入0.1%的HgCl₂溶液处理8 ~ 9 min，无菌水冲洗5次，以无菌滤纸吸干叶片表面水分，用解剖刀分别从叶片基部、中部及顶部切取0.7 cm × 0.7 cm的叶片小块，然后接种。

1.4 培养条件：将幼嫩的叶片基部及叶片中部和顶部的切块接种到不同培养基上,基本培养基为MS培养基,附加不同种类激素、3%蔗糖、0.7%琼脂粉, pH 5.8 ~ 6.0。生根培养基为1/2MS培养基。各分化阶段在培养基中添加的激素种类及浓度见表1~3，培养温度为(25 ± 2)℃，光照时间12 h·d^-1，光强度为2000 lx。

表1 激素对山麦冬愈伤组织诱导的影响

Table 2 The effect of hormones on callus induction of Liriope spicata

编号 Number	愈伤组织培养基 Media for callus induction			生长情况 Growth situation
	6-BA(mg/L)	NAA(mg/L)	IBA(mg/L)
1	2.0	0.2		增殖较快，出现少量芽分化
2	2.0	0.5		增殖较快，出现少量芽分化
3	2.0	1.0		增殖较快，出现少量芽分化
4	2.0		0.2	生长较为缓慢
5	2.0		0.5	生长较为缓慢
6	2.0		1.0	生长较为缓慢

注：基本培养基：MS.

Note: Base Media: MS

表2 激素对山麦冬芽分化的影响

Table 2 The effect of hormones on shoot regeneration of Liriope spicata

编号 Number	芽分化培养基 Media for shoot regeneration		芽生长情况 Growth situation of shoot
	6-BA(mg/L)	NAA(mg/L)
1	2.0	0.2	愈伤组织不再增殖，分化的小芽多而均匀
2	2.0	0.5
3	2.0	1.0

注：基本培养基：MS.

Note: Base Media: MS.

表3 激素对山麦冬根的影响

Table 3 The effect of hormones on rooting of Liriope spicata

编号 Number	芽分化培养基 Media for shoot regeneration		根生长情况 Growth situation of root
	6-BA(mg/L)	NAA(mg/L)
1	0	0.1	根生长较慢
2	0	0.3	根生长较快
3	0	0.5	根生长较慢

注：基本培养基：1/2MS.

Note: Base Media: 1/2MS

2 结 果

2.1 愈伤组织的诱导及增殖培养 接种到6种培养基的外植体，11 d后，叶片切口处接触培养基的部位开始膨大肿胀，初期为白色，18 d后，转为淡黄色、质地紧密的愈伤组织，28 d左右出现少量绿色颗粒状物，并不断扩大。以后每10 d继代一次，以获得大量愈伤组织。培养基4号、5号、6号中愈伤组织生长较为缓慢，培养基1号、2号、3号上的愈伤组织增殖较快，30 d后，愈伤组织可增殖2.5倍，并在继代过程中出现少量芽的分化，适于作芽诱导培养基。

2.2 不定芽的分化及增殖培养 将培养基1号、2号、3号中的绿色颗粒状愈伤组织切成小块转接到相同培养基上进行不定芽分化培养，培养10 d后，愈伤组织上有不定芽分化，再培养20 d后形成大量丛生芽。1号培养基效果最佳，愈伤组织不再增殖，分化的小芽多而均匀。将芽丛分切成小芽丛，在1号培养基上进行继代培养，每10 d天继代一次，3代后，不定芽增殖系数可达2 ~ 3。

2.3 生根培养 将丛生不定芽分切为单芽，接种于1号、2号、3号培养基上，7 d后开始生根，15 d时均产生4 ~ 5条根，25 d后，根平均长度2 ~ 2.5 cm，以2号培养基的效果最佳，生根率达90%以上，且根粗壮，植株生长旺盛。

2.4 炼苗与移栽 将生根试管苗的玻璃瓶置于室温自然光（避免太阳光直射）下打开瓶口炼苗3 d，然后小心取出试管苗，洗净基部培养基，栽植于含水量为60%的蛭石育苗盘中，喷洒1：700的多菌灵溶液，保持适当的温湿度，2周后，苗成活率达98%以上。

3 结 论

诱导山麦冬叶片形成愈伤组织的最佳培养基是：附加2 mg/L 6-BA 、0.2 mg/L NAA；附加2 mg/L 6-BA  、0.5 mg/L NAA；附加2 mg/L 6-BA 、1 mg/L NAA和3%蔗糖的MS培养基，所含细胞分裂素与生长素的比例分别为10: 1、4: 1、2: 1；诱导不定芽分化的最佳培养基是：附加2 mg/L 6-BA  、0.2 mg/L NAA和3%蔗糖MS培养基；在附加0.3 mg/L NAA和3%蔗糖的1/2MS培养基上最终诱导生根。

生根试管苗炼苗3 d后栽植于含水量为60%的蛭石育苗盘中，2周后，苗成活率达98%以上。

参考文献：

[1] 别运清,等. 麦冬的组织培养与快速繁殖. 农村经济与科技, 2001, 12 (103): 23

[2] 陈崇兵. 麦冬与其混淆品及伪品的鉴别. 时珍国医国药, 2003, 14 (11): 672

[3] 林美爱，等. 山麦冬组织培养技术的研究. 中药材, 2004, 27 (12): 893-894

[4] 赵冰清. 麦冬与山麦冬的鉴别. 湖南中医杂志, 2003, 19 (1): 53-54

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]，北京：化学工业出版社，2005：19

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]，北京：化学工业出版社，2005：106-107

[7] 许宝辉. 百合子房组织培养研究. 西南科技大学学报, 2003, 18 (3): 65-67

[8] 赵庆芳, 等. 东方百合组织培养和快速繁殖研究. 西北师范大学学报, 2003, 39 (1): 66-68